《植物生理学报》 2008, 44(2): 329-333

NtDREB2-PDI 融合蛋白的纯化及与DRE 元件结合能力的检测

冯锋，刘卫群*

河南农业大学生命科学学院，郑州450002

通信作者：刘卫群；E-mail: liuweiqun2004@126.com；Tel: 0371-63558722

摘　要：

将从普通烟草(Nicotiana tobaccum‘) K326’中克隆得到的转录因子基因 NtDREB2，采用 PCR 去除 NtDREB2 基因的 终止密码子，酶切后构建入 PDI/pET28a 融合表达载体。取测序正确的重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经 IPTG 诱导， SDS-PAGE 检测表达后，用 Ni-NTA 纯化融合蛋白，获得了高效表达的可溶性目的蛋白。凝胶滞留(EMSA，electrophoresis mobility shift assay)实验表明融合蛋白具有结合 DRE (dehydration-responsive element)元件的能力。

关键词：NtDREB2；蛋白质二硫键异构酶；融合蛋白；诱导表达；纯化；凝胶滞留

收稿：2007-11-05   修定：2008-02-21

资助：河南省科技攻关项目(0624050012)。

NtDREB2-PDI 融合蛋白的纯化及与DRE 元件结合能力的检测

冯锋，刘卫群*

河南农业大学生命科学学院，郑州450002

Corresponding author: ; E-mail: liuweiqun2004@126.com; Tel: 0371-63558722

Abstract:

将从普通烟草(Nicotiana tobaccum‘) K326’中克隆得到的转录因子基因 NtDREB2，采用 PCR 去除 NtDREB2 基因的 终止密码子，酶切后构建入 PDI/pET28a 融合表达载体。取测序正确的重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经 IPTG 诱导， SDS-PAGE 检测表达后，用 Ni-NTA 纯化融合蛋白，获得了高效表达的可溶性目的蛋白。凝胶滞留(EMSA，electrophoresis mobility shift assay)实验表明融合蛋白具有结合 DRE (dehydration-responsive element)元件的能力。

Key words: NtDREB2；蛋白质二硫键异构酶；融合蛋白；诱导表达；纯化；凝胶滞留